Быстрый и медленный миозины как маркеры повреждения мышц

Установлено, что быстрый и медленный миозин могут выступать как маркеры повреждения мышц.  Оценка уровня быстрого и медленного миозинов в крови через двое суток после травмы позволяет обнаружить повреждения I степени, так как быстрый миозин – исключительный маркер повреждения скелетной мышцы. Правильный диагноз позволяет предотвратить прогрессию повреждений у атлетов и помочь спортивным врачам в принятии решения.

Типы мышечнных волокон

Guerrero, M. Fast and slow myosins as markers of muscle injury / M. Guerrero, M. Guiu-Comadevall, J. A. Cadefau, J. Parra, R. Balius, A. Estruch, G. Rodas, J. L. Bedini, R. Cussó // British Journal of Sports Medicine.– 2008 July, 42.– V.7.- P.581-584

Гуэрреро М.

БЫСТРЫЙ И МЕДЛЕННЫЙ МИОЗИНЫ КАК МАРКЕРЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ МЫШЦ

ABSTRACT

Цель: диагноз мышечных повреждений, перенесенных атлетами обычно делается в соответствии с клиническими критериями, объединенными с отображением повреждения (УЗИ (ультразвук) и/или МРТ), а также на основе анализов крови с целью обнаружить присутствие неспецифических маркеров повреждения мышцы. Это исследование было предпринято, чтобы оценить повреждение быстрых и медленных мышечных волокон, используя специфические маркеры повреждения этих волокон.

Более подробно строение и функции мышц описаны в моих книгах:

Методы: Образцы крови были получены от мужчин (n=51) не занимающих спортом и 38 спортсменов с повреждением скелетных мышц. Исследование крови (Western blood analysis) было выполнено, c целью определить быстрый и медленный миозины и уровень креатинкиназы. Повреждение скелетной мышцы было диагностировано физической экспертизой, УЗИ и МРТ, а также посредством биохимических маркеров.

Результаты: оптические тесты превосходны для того, чтобы обнаружить и подтвердить повреждение II и III степени. Однако, повреждения I степени этими методами не подтверждаются. Повреждения I степени характеризуются наличием в крови высокого уровнем быстрого миозина, немного меньшим медленного миозина и очень небольшим увеличением уровня креатинкиназы. Повреждения II и III степени характеризуются высоким уровнем как быстрого, так и медленного миозинов.

Заключение: оценка уровня быстрого и медленного миозинов в крови через 48 часов после повреждения позволяет обнаружить повреждения I степени, так как быстрый миозин – исключительный маркер скелетной мышцы. Правильный диагноз повреждения I степени может предотвратить прогрессию повреждений у атлетов, подвергающихся непрерывным тренировочным нагрузкам и соревнованиям, таким образом помогая спортивным врачам в принятии решения.

ВВЕДЕНИЕ

Мышца чувствительна к тренировочным протоколам, так как ее структура рассчитана на то, чтобы соответствовать им и адаптироваться к новым силовым нагрузкам. Однако, если целостность мышцы нарушена перегрузкой в большей или меньшей степени, происходит повреждение мышцы. Эти повреждения могут привести к неспособности к продолжению развития силы.

Использование непривычных упражнений и развитие высокого уровня силы при эксцентрических упражнениях приводит к повреждению мышцы с изменениями в ее структуре и функции. Это вызывает повреждение мембран мышечного волокна,1,2, разрушение миофибрилл3 и саркоплазматического ретикулума4. Такое вызванное упражнением повреждение мышцы активизирует каскад реакций, которые приводят к активизированному метаболизму белка скелетной мышцы. Немедленно после упражнения активизируется протеаза калпаин. Калпаин начинает метаболическое разрушение миофибриллярных белков, освобождая их из структуры миофиламентов5. Хотя калпаин не производит деградации актина и миозина, она вносит свой вклад в их выход в кровь6. Это позволяет обнаружить эти белки в периферийной крови после расщепления, используя оценку специфических индикаторов типа тропонина I (TnI) и тяжелых цепочек миозина (MHC).7,8 Sorichter et al9 описали особенности идеального маркера повреждения мышечного волокна. Во-первых, этот маркер должен быть специфически мышечным маркером, позволяющим диагносцировать повреждение мышечных волокон. Ни один из маркеров, проанализированных этими авторами, не является специфическим для мышцы.

Обычно используемые маркеры включают: креатинкиназу, сердечно-жирную кислоту связывающую белок, миоглобин, TnI (Тропонин I) и α-актин10. Однако, в дополнение к тому, чтобы они не являются полностью специфичными для скелетной мышцы, эти маркеры достигают максимального уровня менее чем за 10 часов после повреждения и существенно уменьшаются в течение 24 часов. Большинство повреждений происходит в течение выходных дней, и проходит более 10-12 критических часов, прежде чем пациент исследован. Новые повреждения часто не сопровождаются болью, но день спустя маркеры с низкой молекулярной массой деградируют не оставляя следа в сыворотке крови. Тропонины – белки, которые являются очень специфическими маркерами повреждения мышечных волокон; они имеют низкую молекулярную массу, но восприимчивы к протеолизу, что объясняет их очень короткое время полураспада в крови11.

Скелетная мышца – гетерогенная ткань, составленная из волокон I и II типов, соотношение которых зависит от типа мышцы и даже от области мышцы, в которой определялось это соотношение12. Некоторые из сократительных белков имеют различные изоформы в зависимости от типа волокна. Один из них – миозин, который имеет тяжелую и легкую изоформы, в зависимости от того, быстрый ли тип волокна или медленный13.

Миозин представляет собой идеальный маркер степени повреждения, из-за его высокой молекулярной массы. Его присутствие в крови можно объяснить только повреждением мышечного волокна. Быстрый миозин характерен только для быстрых скелетных мышц, в то время как медленный миозин характеризует как скелетную, так и сердечную мышцу. Уровень медленного миозина в крови был измерен Schiaffino и Reggiani14 и достигает максимальных значений через 48 и 72 часа после повреждения.

Цель этого исследования состоит в том, чтобы оценить повреждение мышцы, используя в качестве маркеров быстрый и медленный миозины в сыворотке крови атлетов через 48 часов после повреждения. Сравнить эффективность этих маркеров по обнаружению повреждения с УЗИ и МРТ, а также биохимическими методами.

МЕТОДЫ

Материалы

Материалы, используемые в исследовании были: моноклональный антимиозин (быстрый, скелетный) клон Мy-32 (Sigma, Мадрид, Испания), моноклональный антимиозин (медленный, скелетный) клон NOQ7.5.4D (Sigma), агароза (Sigma), белок A (Sigma) и loading buffer Nupage LDS типовой буфер (Novex, Калифорния, США).

Исследуемые

Были изучены тридцать шесть спортсменов в возрасте 18-25 лет (атлеты, жокеи, теннисисты, футболисты, баскетболисты и спортсмены, занимающиеся пятиборьем), которые испытывали боли в мышцах и/или их повреждение. Группа контроля включала 51 мужчину не занимающихся спортом в возрасте 18-55 лет.

Повреждения мышцы были классифицированы по трем категориям согласно клиническим полученным данным: повреждения I степени (DOMS, растяжение, небольшой разрыв мышцы); повреждение II степени (повреждение мышечных волокон, средний разрыв мышцы); повреждение III степени (разрушение мышечного волокна, видимый разрыв мышцы). Два мл крови были получены от 51 исследуемого контрольной группы и от атлетов через 48 часов после того, как они почувствовали проблемы с мышцами. Сыворотка крови использовалась для измерения уровней миозина.

Обработка образца

Образцы крови были получены в трубе Vacutainer и центрифугировались в 2000g в 4°C около 10 мин. Сыворотка сохранялась при температуре –80°C без потери миозина в течение 15 дней. Белок сыворотки крови определялся Брэдфордским методом15. Миозин присутствует как маркер в крови при очень низкой концентрации по сравнению с другими белками сыворотки.

Измерение ферментативных действий

Уровень креатинкиназы оценивался посредством Technicon DAX System автоанализатора согласно методу Szasz et al17.

Отображение повреждения

Эхография (УЗИ) выполнялась в Центре d’Estudis d’Alt Rendiment Esportiu (CEARE) и в ультразвуковом отделе Клиники FIATC. Использовалось оборудование Toshiba Medical System Системы с многочастотным исследованием (Just-Vision в CEARE, PowerVision в FIATC). МРТ исследования были проведены в отделе МРТ Клиники Corachan, используя устройство Siemens SYMPHONY (1.5 ТESS).

Оба типа сканирования дали результаты, которые увеличились в прямой пропорции со степенью повреждения. При повреждениях I степени УЗИ обычно показывает повреждение (гемоокрашивание и дефект некоторых волокон) спустя 2-3 дня после несчастного случая, в то время как МРТ показывает мышечный отек со времени повреждения. При повреждениях II степени и УЗИ и МРТ показывают отек и повреждение волокон. При повреждениях III степени виден большой отек и дефект, связанный с гематомой мышцы. И УЗИ и МРТ показывают развитие повреждения, наблюдая, как исчезает отек и осуществляется ремонт мышечных волокон.

Статистический анализ

Сравнивались уровни каждого маркера в контрольной группе и среди спортсменов с различным уровнем повреждения посредством дисперсионного анализом (ANOVA); оценки уровня значимости p <0,05 считались существенными.

РЕЗУЛЬТАТЫ

МРТ

Рис.1 показывает МРТ-изображения трех различных видов повреждения мышцы. Рис.1А – осевое представление повреждения I степени в верхней части правого бедра, показывая зону отека мышцы (сигнал увеличен), который вызван недавним надрывом двуглавой мышцы бедра (стрелки).

МРТ изображение различных степеней повреждения мышцы
Рис.1. МРТ изображение различных степеней повреждения мышцы (А) – I степени, (В) – II степени, (С) – III степени.

Рис.1В осевое представление повреждений II степени в медиально-дистальной части левого бедра показывая область отека (увеличение сигнала) и дефект мышечных волокон, вызванный недавним повреждением в длинной голове двуглавой мышце бедра (стрелки). В корональном представлении повреждения III степени дистальной части бедра, показанного на рис. 1С, большая область отека (увеличение сигнала) и обширный дефект мышечных волокон прямой мышцы бедра могут быть замечены в отдалённой от центра части (стрелки).

Ультразвуковые изображения

Ультразвуковое изображение различных степеней повреждения мышцы (А) – I степени, (В) – II степени, (С) – III степени.
Рис. 2. Ультразвуковое изображение различных степеней повреждения мышцы (А) – I степени, (В) – II степени, (С) – III степени.

Рис. 2 показывает ультразвуковое изображение повреждений, изображенных на рис.1. Рис. 2A – продольный разрез области повреждения I степени, показывая, что область дефектов мышечных волокон находится между двуглавой мышцей бедра и полусухожильной мышцей. Продольный разрез области повреждений II степени, показанных на рис 2В указывает на самую обширную область дефектов мышечных волокон и гемоокрашивание в длинной головке двуглавой мышцы бедра. Ультразвуковое появление повреждений III степени, рис. 2С показывает полный дефект прямой мышцы бедра (стрелки).

Клинический диагноз, маркерные ферменты и миозин в нормальных и травмированных мышцах

Таблица 1 показывает нормальный уровень сыворотки крови у группы контроля и у атлетов с различной степенью повреждений мышцы.

Наши результаты указывают, что, в нормальном состоянии, концентрация быстрого и медленного миозинов в крови не превышала 1000 мг/мл – быстрого миозина и 2000 мг/мл – медленного миозина, показывая отношение быстрого миозина к медленному как 0,3. У пациентов с диагнозом повреждений I степени, которые не отображались на МРТ и УЗИ изображениях были отмечены высокие уровни быстрого миозина (больше чем медленного миозина), показывая отношение быстрого миозина к медленному > 2. Уровень креатинкиназы (КК) был почти нормальным. При повреждениях II и III степени, которые были диагностированы посредством УЗИ и МРТ уровень и быстрого и медленного миозинов возрос, так что отношение концентрации быстрого миозина к медленному было близко к 1,0. Концентрация медленного миозина по сравнению с быстрым миозином увеличилась в прямой пропорции к степени повреждения. Уровень КК также увеличился в том же самом направлении с возрастанием серьезности повреждений, что говорит о том, что он – очень хороший маркер для оценки повреждений II и III степени. Таблица 1

Диагноз

N

ультразвук

(УЗИ)

МРТ

Креатинкиназа,

u/л

Быстрый миозин,

мг/л

Медленный миозин, мг/л

Отношение быстрого миозина к медленному

норма

51

102(8)

625(62)

1535(166)

0,3

повреждение I степени

12

(-)0(-)

202(22)

2880(159)

1281(197)

2,2

повреждение II степени

16

++

++

482(47)

3432(402)

3722(700)

0,9

повреждение III степени

10

+++

+++

739(245)

8055(2200)

6518(124)

1,2

Примечание: представлены средние значения (ошибка среднего), Дисперсионный анализ свидетельствует о достоверных различиях между всеми параметрами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Человеческие мышцы представляют собой смесь медленных и быстрых волокон приблизительно с 50 % каждого типа. Этим они отличаются от животных, некоторые мышцы которых содержат 90 % быстрых волокон и приблизительно до 90 % медленных волокон. Широкая латеральная мышца молодых Кавказских атлетов в возрасте 15-18 лет имеет 36,5 % волокон медленного типа и 63,5 % волокон быстрого типа, из них 52,3 % — тип IIa, 8,1 % – тип IIb и 3,1 % – тип IIc18. Существование смешанных мышц у людей означает, что при их повреждениях в кровь поступают быстрый и медленный миозины. Однако, вследствие того, что сопротивление к повреждениям и утомлению этих двух типов волокон неодинаково, уровень медленного или быстрого миозина в крови зависит от типа поврежденного волокна. Вообще, быстрые волокна более легко повреждаются и более чувствительны к повреждению. Мы можем, поэтому ожидать, что быстрые волокна теряют свои быстрые MHC раньше, чем медленные волокна при менее интенсивном упражнении. Медленные MHC выходят в кровь при более утомительных упражнениях, и их присутствие в крови, вероятно указывает на более существенное повреждение.

С другой стороны, присутствие быстрых MHC в крови свидетельствует о том, что повреждена только скелетная мышца и таким образом представляет абсолютно специфический маркер. Присутствие медленных MHC может указывать на повреждения скелетной и/или сердечной мышцы. Однако, учитывая тот факт, что исследуемые были атлетами, у которых исключено сердечное повреждение, обнаружение медленных MHC в крови являлось бы маркером повреждения медленных волокон.

Мы развили метод, для обнаружения в крови миозинов, основанного на определении быстрых и медленных антител миозина. Мы изучили группу атлетов, участвующих в различных спортивных соревнованиях, которые ощущали боль в мышцах. Пациенты подверглись медицинской экспертизе, УЗИ и МРТ. У них брались анализы крови, которые включали измерение уровня креатинкиназы (используемый как обычный маркер повреждения мышцы), а также уровней быстрого и медленного миозина. Мы также изучили 51 человека, которые не занимались спортом, составивших контрольную группу. Наши результаты указывают, что, через 48 часов после возникновения проблем в мышце, уровень креатинкиназы незначительно возрастает при повреждениях I степени. Только быстрый миозин достигает высокого уровня, что позволяет предположить, что повреждения I степени происходят в волокнах II типа. Результаты УЗИ и МРТ при повреждениях I степени в некоторых случаях являются неявными, с отрицательными или положительными результатами, которые не в состоянии удостоверить полное признание повреждения. УЗИ и МРТ при повреждениях II и III степени были очень эффективны в обнаружении повреждений.

При повреждениях II степени измерение маркеров сыворотки крови показало увеличение уровня креатинкиназы а также увеличение уровней обоих типов миозина, достигая в некоторых случаях десятикратного увеличения по сравнению с нормой. Повреждения III степени хорошо детектируются креатинкиназой и обоими типами миозина.

Мы заключаем, что быстрый миозин является очень чувствительным маркером повреждений I степени. Степень диагносцирования посредством быстрого миозина находится на уровне МРТ и превосходит УЗИ и клинический диагноз. Быстрый миозин – специфичный маркер повреждения скелетной мышцы, уровень которого не могут достичь маркеры, используемые в настоящее время, типа креатинкиназы и миоглобина. Миозин также имеет преимущество из того, что он более чувствительный и более устойчивый в крови. Так как его максимальный уровень достигается чрез 48 часов после повреждения, и он дольше остается в крови, поэтому может легче применяться при запаздывающем диагностировании, а также может использоваться, чтобы следить за развитием повреждения мышцы. Мы поэтому заключаем, что определение быстрых и медленных миозинов — полезная помощь в диагнозе повреждений мышцы, особенно в тех случаях, которые трудно обнаружить другими методами.

Одобрение этики: Это исследование было одобрено комитетом этики Университета Барселоны и комитета этики Клиники Больницы Провинции Барселоны.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Armstrong RB, Ogilvi RW, Schwane JA. Eccentric exercise-induced injury to rat skeletal muscle. J Appl Physiol 1983; 436: 735–41.
  2. Newman DJ, Jones DA, Ghosh G, et al. Muscle fatigue and pain after eccentric contractions at long and short length. Clin Sci 1988; 74: 553–7.[Medline]
  3. Friden J, Lieber RL. Structural and mechanical bases of exercise-induced muscle injury. Med Sci Sports Exerc 1992; 24: 521–30.[Medline]
  4. Frias JA, Cadefau JA, Prats C, et al. Disturbances of the sarcoplasmic reticulum and transverse tubular system in 24-h electrostimulated skeletal muscle. Biochem Biophys Acta 2005; 1668: 64–74.[Medline]
  5. Belcastro AN, Gilchrist JS, Scrubb JA, et al. Calcium-supported calpain degradation rates for cardiac myfibrils in diabetes. Sulfhydryl and hydrophobic interactions. Mol Cell Biochem 1994; 15: 51–60.
  6. Goll DE, Thompson VH, Taylor RG, et al. Is calpain activity regulated by membranes and autolysis or by calcium and calpastatin? BioEssays 1992; 14: 549–56.[CrossRef][Medline]
  7. Sorichter S, Mair J, Koller A, et al. Skeletal troponin I as a marker of exercise-induced muscle damage. J Appl Physiol 1997; 83: 1076–82.[Abstract/Free Full Text]
  8. Sorichter S, Mair J, Koller A, et al. Skeletal muscle troponin I release and magnetic resonance imaging signal intensity changes after eccentric exercise-induced skeletal muscle injury. Clin Chim Acta 1997; 262: 139–46.[CrossRef][Medline]
  9. Sorichter S, Puschendorf B, Mair J. Skeletal muscle injury induced by eccentric muscle action: muscle proteins as markers of muscle fiber injury. Exerc Immunol Rev 1999; 5: 5–21.[Medline]
  10. Martinez A, Marchal JA, Rodriguez F, et al. Role of Быстрый и медленный миозины как маркеры повреждения мышц-actin in muscle damage of injured athletes in comparison with traditional markers. Br J Sports Med 2007; 41: 442–6.[Abstract/Free Full Text]
  11. Ebbeling CB, Clarkson PM. Exercise-induced muscle damage and adaptation. Sports Med 1989; 7: 207–34.[Medline]
  12. Lexell J, Henrikson-Larsen K, Sjostrom M. Distribution of different fibre types in human skeletal muscles. 2. A study of cross-sections of whole m. vastus lateralis. Acta Physiol Scand 1983; 117: 115–22.[Medline]
  13. Pette D, Staron RS. Myosin isoforms, muscle fiber types, and transitions. Microsc Res Tech 2000; 50: 500–9.[CrossRef][Medline]
  14. Schiaffino S, Reggiani C. Molecular diversity of miofibrillar proteins: gene regulation and funtional significance. Physiol Rev 1996; 76: 371–423.[Abstract/Free Full Text]
  15. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilising the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1976; 72: 248–54.[CrossRef][Medline]
  16. Hasten DL, Morris GS, Ramanadham S, et al. Isolation of human skeletal muscle myosin heavy chain and actin for measurement of fractional synthesis rates. Am J Physiol Endocrinol Metab 1998; 275: E1092–9.[Abstract/Free Full Text]
  17. Szasz G, Gruber W, Bernt E. Creatine kinase in serum. Determination of optimun reaction conditions. Clin Chem 1976; 22: 650–6.[Abstract/Free Full Text]
  18. Cadefau JA, Casademont J, Grau JM, et al. Biochemical and histochemical adaptation to sprint training in young athletes. Acta Physiol Scand 1990; 140: 341–51.[Medline]

Перевод выполнен А.В. Самсоновой

2008_M_-Guerrero_-et_-al_Перевод.pdf

Похожие записи:


Типы конституции по А.А. Богомольцу
Описана биография Александра Александровича Богомольца и типы конституции человека, основанные на состоянии соединительной ткани: астеническая; фиброзная; пастозная…

Типы телосложения по Шевкуненко-Геселевичу
Описана краткая биография В.Н. Шевкуненко и А.М. Геселевича, а также классификация типов телосложения человека: долихоморфного, мезоморфного и брахиморфного…

Способы восстановления мышц после силовой тренировки
Приглашение к участию в анкетном опросе, посвященному способам восстановления мышц после силовой тренировки. Анкетный опрос проводит магистрантка кафедры…

Отсроченное начало болезненности мышц. Стратегии лечения и факторы эффективности
Описаны симптомы, причины, теории отсроченного начала болезненности мышц (запаздывающих болезненных ощущений, DOMS), а также способы уменьшения этих болей:…

Срочные гормональные ответы у элитных тяжелоатлетов-юниоров
Изучалось изменение концентрации в крови: тестостерона, кортизола, гормона роста, бета-эндорфина и лактата у тяжелоатлетов-юниоров…

Метод «до отказа» для развития силовых способностей человека
В статье рассмотрено применение низко- средне- и высокоинтенсивного метода «до отказа» для развития силы, силовой выносливости и…